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ELISA試劑盒中抗原與抗體的影響因素

發(fā)布時間:2018-05-18   點擊次數(shù):1951次

抗原是能在機體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)。小分子化合物在與大分子蛋白質(zhì)結(jié)合后能引起機體產(chǎn)生特異性抗體的,稱為半抗原(hapten)??乖M(jìn)入機體后,可刺激機體產(chǎn)生抗體和引起細(xì)胞免疫。例如某些激素、藥物等。能在機體中引起抗體產(chǎn)生的抗原多為分子量大于5000的蛋白質(zhì)。ELISA是一種免疫測定。一個抗原分子可帶有不同的決定簇。在免疫測定中,抗原是指能與抗體結(jié)合的物質(zhì)。在臨床檢修中主要通過抗原抗體反應(yīng)檢測體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。抗原的反應(yīng)性取決于抗原決定簇(antigenic determinant),或稱為表位(epitope)。免疫測定(immunoassay,IA)是應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)測定標(biāo)本的方法。
IgG和IgM的重鏈分別稱為γ(gamma)鏈和μ(mu)鏈??贵w是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤?,?kappa;(kappa)和λ(Lambda)兩種型別。Ig分五類,即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE.與免疫測定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM.Ig由兩個輕鏈(L)和兩個重鏈(H)的單體組成。五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同,這決定了它們的抗原性也不同。IgG的結(jié)構(gòu)見圖。
IgG可被木瓜蛋白酶分解為三個區(qū)段,其中兩個相同的區(qū)段稱抗原結(jié)合片斷(Fab)。兩者構(gòu)成抗體的抗原結(jié)合部位,只與相應(yīng)的抗原決定簇匹配,發(fā)生特異性結(jié)合,是抗體專一性結(jié)合抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。每個Fab都保留結(jié)合抗原的能力,但只有一個抗原結(jié)合位點,是單價的,與抗原結(jié)合后不泛起凝集或沉淀。另一區(qū)段稱Fc段,無抗體活性,但具有IgG*的抗原性。重鏈和輕鏈的N真?zhèn)€氨基酸排列順序因各種抗體而異,稱為可變區(qū),分別用VH和VL表示。
如將多種抗原或含有多個抗原決定簇的抗原注入機體,則將由多系的B細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的多種抗體,這些抗體均存在于免疫血清中。含有抗體的血清稱為抗血清。免疫測定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或馬制得。將免疫的脾細(xì)胞(含產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞)與小鼠腫瘤細(xì)胞融合,分離雜交瘤細(xì)胞,接種于小鼠腹腔,產(chǎn)生的腹水中含有濃度很高的單克隆抗體。每一系B細(xì)胞只產(chǎn)生針對某一抗原決定簇的抗體。單克隆抗體通常用抗原免疫小鼠制備。產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞可在體外與繁殖力強的腫瘤細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞。將單個雜交瘤細(xì)胞分離,在體內(nèi)或體外培養(yǎng)而分泌的抗體單克隆抗體。單克隆抗體僅針對一種抗原決定簇,具有很高的特異性。

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