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植物elisa試劑盒檢測(cè)的操作流程及注意事項(xiàng)說(shuō)明

發(fā)布時(shí)間:2019-10-18   點(diǎn)擊次數(shù):2274次
   植物elisa試劑盒檢測(cè)將純化的人白細(xì)胞介素抗體涂于微孔板上,制成固相抗體。將白細(xì)胞介素依次加入包被單克隆抗體的微孔中,與HRP標(biāo)記的白細(xì)胞介素抗體結(jié)合形成抗體-抗原-酶標(biāo)記的抗體復(fù)合物。在*清洗后,將基板TMB添加到顏色中。在使用之前,應(yīng)在室溫下將工具箱從冷藏環(huán)境中取出15-30分鐘。如果打開(kāi)后酶標(biāo)板沒(méi)有用完,應(yīng)將酶標(biāo)板存放在密封袋中。在使用之前,應(yīng)在室溫下將工具箱從冷藏環(huán)境中取出15-30分鐘。如果打開(kāi)后酶標(biāo)板沒(méi)有用完,應(yīng)將酶標(biāo)板存放在密封袋中。
 
  植物elisa試劑盒檢測(cè)的操作流程如下:
  1、待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
  2、酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
  3、洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
  4、陰性對(duì)照孔每孔加入PBS50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
  5、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
  6、洗板,同(4)。
  7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液100μl。
  8、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
  9、洗板,同(4)。
  10、每孔加TMB顯色液100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
  11、每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應(yīng)。
  12、分別測(cè)450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
  13、數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
 
  植物elisa試劑盒檢測(cè)的操作注意事項(xiàng):
  1、試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
  2、實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
  3、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
  4、使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
  5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品
  6、洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
  7、底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
  8、加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
  9、按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
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